Для чего требуется определение колоний бактерий

Методы выделения и идентификации бактерий

Микроскопия материала

Любое бактериологическое исследование начинается с микроскопии материала и его последующего посева на питательные среды. Эффективность выделения возбудителя в значительной степени обусловлена правильной техникой отбора образцов клинического материала, своевременностью их доставки в лабораторию и правильным хранением образцов.

Специальные методы окраски бактерий. Наибольшее распространение нашли методы Грама и Циля-Нильсена.

Дифференцирующие методы обычно применяют для окрашивания различных морфологических структур.  

Капсулы. Для окраски капсул бактерий применяют методы Хисса, Лейфсона и Антони; последний метод наиболее прост и включает окраску кристаллическим фиолетовым с последующей обработкой 20% водным раствором CuSO4.

Жгутики. Для окраски жгутиков предложены методы Лёффлера, Бейли, Грея и др. Для этих методов характерны первоначальное протравливание препарата и последующая окраска (чаще карболовый фуксин Циля).  

Споры. Окраску спор бактерий проводят после предварительной обработки их стенок. Наиболее прост метод Пешкова, включающий кипячение мазка с синькой Лёффлера на предметном стекле с последующей докраской нейтральным красным. Споры окрашиваются в синий цвет, вегетативные клетки — в розовый.

Методы культивирования

При выращивании бактерий применяют стационарный способ, способ глубинного культивирования с аэрацией и метод проточных питательных сред.

В соответствии со способами выращивания бактериальные культуры разделяют на периодические (при стационарном и глубинном культивировании) и непрерывные (при проточном культивировании).

Стационарный способ — наиболее часто используемый на практике. Состав сред остаётся постоянным, с ними не проводят никаких дополнительных манипуляций.

Способ глубинного культивирования применяют при промышленном выращивании бактериальной биомассы, для чего используют специальные котлы-реакторы.

Они снабжены системами поддержания температуры, подачи в бульон различных питательных веществ, перемешивания биомассы и постоянной подачи кислорода.

Создание аэробных условий по всей толще среды способствует протеканию энергетических процессов по аэробному пути, что способствует максимальной утилизации энергетического потенциала глюкозы и, следовательно, максимальному выходу биомассы.

Метод проточных сред (промышленный способ культивирования) позволяет постоянно поддерживать бактериальную культуру в экспоненциальной фазе роста, что достигают постоянным внесением питательных веществ и удалением определённого числа бактериальных клеток. Пребывание бактерий в экспоненциальной стадии роста обеспечивает максимальный выход различных БАВ (витамины, антибиотики и др.).

Первичная идентификация бактерий

В большинстве случаев изучение особенностей роста для первичной идентификации возбудителей проводят на колониях, выросших в течение 18-24 ч. Характер роста бактерий на различных средах может дать много полезной информации.

На твёрдых средах бактерии формируют колонии — изолированные структуры, образующиеся в ре зультате роста и накопления бактерий. Колонии возникают как следствие роста и размножения одной или нескольких клеток.

Таким образом, пересев из колонии в дальнейшем даёт возможность оперировать с чистой культурой возбудителя. Рост бактерий на плотных средах имеет больше характерных особенностей.

Гемолиз

Некоторые бактерии выделяют гемолизины — вещества, разрушающие эритроциты. На КА их колонии окружают зоны просветления.

Образование гемолизинов (и соответственно — размеры зон гемолиза) может быть вариабельным, и для адекватного определения гемолитической активности следует просматривать чашки с посевами против источника света (рис. 1-14).

Активность гемолизинов может проявляться в полном или неполном разрушении эритроцитов.

α-Гемолиз. Разрушение эритроцитов может быть неполным, с сохранением клеточной стромы. Подобный феномен называют α-гемолиз. Просветление среды вокруг колоний обычно незначительно, позднее среда вокруг колоний может приобретать зеленоватую окраску. Подобный рост характерен для пневмококка, а также для группы так называемых зеленящих стрептококков.

β-Гемолиз. Гораздо большая группа бактерий вызывает полное разрушение эритроцитов, или β-гемолиз. Их колонии окружены прозрачными зонами различного размера.

Например, Streptococcus pyogenes и Staphylococcus aureus образуют большие зоны гемолиза, a Listeria monocytogenes или Streptococcus agalactiae — небольшие, диффузные зоны.

Для определения гемолитической активности не следует применять шоколадный агар (ША), так как образующиеся зоны α- или β-гемолиза не имеют характерных особенностей и вызывают одинаковое позеленение среды.

Размеры и форма колоний

Важные признаки колоний — их размеры и форма. Колонии могут быть большими или мелкими. Величина колоний — признак, позволяющий различать различные виды, роды и даже типы бактерий.

В большинстве случаев колонии грамположительных бактерий мельче колоний грамотрицательных бактерий. Колонии бактерий могут быть плоскими, приподнятыми, выпуклыми, иметь вдавленный или приподнятый центр. Другой важный признак — форма краёв колоний. При изучении формы колоний учитывают характер её поверхности: матовый, блестящий, гладкий или шероховатый.

R-колонии — неправильной формы, шероховатые, с зубчатыми краями.

Цвет колоний

При просмотре посевов также обращают внимание на цвет колоний. Чаще они бесцветные, белые, голубоватые, жёлтые или бежевые; реже — красные, фиолетовые, зелёные или чёрные. Иногда колонии ирризируют, то есть переливаются всеми цветами радуги.

Окрашивание возникает в результате способности бактерий к пигментообразованию. На специальных дифференцирующих средах, включающих специальные ингредиенты или красители, колонии могут приобретать разнообразную окраску (чёрную, синюю и др.) за счёт включения красителей либо их восстановления из бесцветной формы.

В данном случае их окраска не связана с образованием каких-либо пигментов.

Консистенция колоний и особенности роста на среде

Полезную информацию могут дать консистенция колоний и особенности роста на среде. Обычно эту информацию можно получить при прикосновении к колониям петлёй.

Мягкие колонии — маслянистые или сливкообразные; могут быть слизистыми (прилипают к петле) или низкими (тянущимися за петлёй).

Твёрдые колонии — сухие, восковидные, волокнистые или крошковатые; могут быть хрупкими и ломаться при прикосновении петлёй.

Запах

Запах — менее важный признак колоний, поскольку вызываемые им ассоциации носят субъективный характер. В частности, культуры синегнойной палочки имеют запах карамели, культуры листерий — молочной сыворотки, протеев — гнилостный запах, нокардий — свежевскопанной земли.

Биохимические методы идентификации бактерий

Методов, используемых для идентификации особенностей метаболизма бактерий, очень много, но на практике применяют небольшое их количество. Большинство способов основано на использовании дифференциально-диагностических сред, включающих различные индикаторы.

Способность к ферментации углеводов

Способность к ферментации углеводов оценивают по изменению окраски среды вследствие образования органических кислот (соответственно, происходит уменьшение рН), вызывающих изменение окраски индикатора.

«Пёстрый» ряд. Для определения сахаролитической активности применяют среды Хисса; в их состав входят 1% пептонная вода (или МПБ), индикатор Андраде и один из углеводов.

Поэтому этот набор сред и называют «пёстрый» (или цветной) ряд.

Стеклянные поплавки. Для определения способности микроорганизмов ферментировать углеводы с образованием кислоты и газа в сосуды со средами вносят стеклянные поплавки (запаянные с одного конца короткие трубочки), всплывающие после наполнения их газом.

Расщепление белков

Некоторые бактерии проявляют протеолитическую активность, выделяя протеазы, катализирующие расщепление белков. Наличие протеолитических ферментов из группы коллагеназ определяют при посеве уколом в МПЖ.

При положительном результате наблюдают его разжижение в виде воронки либо послойно сверху вниз.

Способность к расщеплению белков и аминокислот также можно оценивать по изменению окраски среды, так как образующиеся продукты — аммиак, индол и сероводород — сдвигают рН в щелочную сторону, вызывая изменение окраски индикатора.

Образование аммиака. Для определения способности к образованию NH3 проводят посев в МПБ, и между его поверхностью и пробкой закрепляют полоску лакмусовой бумаги. При положительном результате бумажка синеет.

Образование индола и H2S.

Обычно для определения способности к образованию индола и сероводорода также проводят посев в МПБ, между его поверхностью и пробкой закрепляют бумажки: в первом случае пропитанные раствором щавелевой кислоты (при образовании индола бумажка краснеет),во втором — раствором ацетата свинца (при образовании H 2 S бумажка чернеет).Также используют специальные среды, содержащие индикаторы (например, среда Клиглера), либо их вносят непосредственно в среду после регистрации видимого роста бактерий.

Тест на нитратредуктазную активность

Этот тест используют для идентификации отдельных видов бактерий. Он позволяет определить способность восстанавливать нитраты в нитриты.

Способность к восстановлению NO3 в N02, определяют культивированием в МПБ, содержащем 1% раствор KNO3. Для определения нитритов в среду добавляют несколько капель реактива Грисса.

При положительном результате наблюдают появление красного кольца.

Хроматография

Хроматографические методы используют для идентификации бактерий и установления их систематического положения. Объекты для исследования — жирные кислоты клеточной стенки, уникальные интермедиаты и конечные метаболиты жизнедеятельности бактерий.

Хроматографические системы обычно сопрягают с компьютерами, что значительно упрощает учёт результатов. Наиболее распространена идентификация жирных короткоцепочечных и тейхоевых кислот методом газожидкостной хроматографии.

У различных родов их содержание и набор различны, но постоянны, что позволяет установить систематическое положение каждого конкретного вида.

Индикаторные бумажки

Для изучения биохимической активности бактерий широко применяют системы индикаторных бумажек или наборы мультимикротестов.

Система индикаторных бумажек (СИБ) — набор дисков, пропитанных различными субстратами.

Их можно непосредственно вносить в пробирки со взвесью бактерий либо предварительно поместить в лунки пластиковых планшетов, куда будут внесены исследуемые бактерии.

Так, на практике применяют наборы Minitek Enterobacteriaceaelll и Minitek Neisseria для дифференциальной диагностики энтеробактерий (четырнадцать субстратов) и нейссерий (четыре субстрата), позволяющие получить результаты через 4 ч инкубации при 37  °С.

Наборы мультимикротестов — пластиковые планшеты, в лунки которых помещены различные субстраты и индикаторы. В лунки вносят различные разведения бактерий и инкубируют при 37 °С. На практике используют тесты RapID NH для идентификации нейссерий и гемофилов, RapID Е для энтеробактерий и др.

, позволяющие получить результаты не позднее 4-8 ч.

Автоматические системы идентификации бактерий

Автоматические системы идентификации бактерий позволяют быстро (на 24-48 ч быстрее обычных методов) получить информацию о виде возбудителя заболевания и его чувствительности к антимикробным препаратам. В настоящее время наибольшее распространение получили системы типа Microscan и Vitek.

Системы Microscan. Используют турбидиметрические, колориметрические и флюоресцентные методы идентификации бактерий. Системы состоят из комплектов пластиковых планшетов, содержащих различные субстраты. Грамположительные и грамотрицательные бактерии дифференцируют с помощью флюоресцирующих субстратов (время анализа — 2 ч).

Для идентификации гемофилов, анаэробов и дрожжей используют хромогенные субстраты, изменяющие свою окраску (время анализа — 4-6 ч). Минимальные ингибирующие концентрации различных антибиотиков определяют по изменению оптической плотности. Система компьютеризирована и автоматически проводит все необходимые расчёты.
Системы Vitek.

В этой системе применяют один тип планшетов с тридцатью лунками. В каждую лунку автоматически вносится суспензия бактерий с известной концентрацией микробных тел. Идентификация микроорганизмов (гемофилы, нейссерии, дрожжи и анаэробы) основана на турбидометрии реакционной среды в лунке.

В зависимости от свойств микроорганизма время, необходимое для его идентификации, варьирует от 4-8 до 18 ч. Система полностью компьютеризирована и работает автоматически.  

Методы идентификации нуклеиновых кислот

Гибридизация нуклеиновых кислот

Наиболее распространены методы гибридизации нуклеиновых кислот. Принцип методов обусловлен способностью ДНК (и РНК) специфически соединяться (гибридизироваться) с комплементарными фрагментами искусственно созданных нитей ДНК (и РНК), меченных изотопами или ферментами (пероксидазой или щелочной фосфатазой). В дальнейшем образцы исследуют различными методами (например, ИФА).

Метод гибридизации в растворах даёт наиболее быстрые результаты. Широкому внедрению метода препятствует проблема удаления не связавшихся нитей нуклеиновых кислот.

Метод гибридизации на твёрдой основе и его сэндвич- модификация распространён больше. В качестве твёрдой основы служат мембраны из нитроцеллюлозы или нейлона. Не связавшиеся реагенты удаляют многократным отмыванием.

Источник: http://biofile.ru/bio/21045.html

Бактериологический посев

Бактериологический посев

Бактериологическим посевом (сокращенно бакпосев) называют лабораторные микробиологические исследования человеческого материала, которые совершают с помощью посева таких частиц на разные питательные среды, расположены в разном температурном режиме. Такие эксперименты проводят для того, чтобы обнаружить в определенном материале количество условно патогенных и условно-патогенных микробов для дальнейшего лечения организма от заболеваний.

Если во время эксперимента произошло выделение определенных микробов, то необходимо провести еще одно исследование — антибиотикограмму, которая определит уровень чувствительности патогенов к препаратам антибактериального действия и бактериофагам.

Плюсы и минусы

При проведении данного исследования существуют свои преимущества (плюсы) и недостатки (минусы). К недостаткам можно отнести то, что процесс обнаружения микроорганизмов длится довольно долго. Также, материал для исследований должен быть взят согласно определенным требованиям. К лаборантам же тоже выдвигаются строгие требования, они должны иметь определенную квалификацию.

Но у такого метода исследования бактериологического посева существует и масса преимуществ. Например, таким образом можно проверить любую жидкость человека.

Также, высокая специфичность эксперимента позволяет исключить ложные реакции, что позволит точно поставить диагноз больному.

Когда назначают проведения бактериологического посева

Основными показаниями для проведения данного микробиологического исследования являются воспалительные процессы в организме человека, а также подозрение на сепсис. Бакпосев широко распространен во всех отраслях медицины. Так, его применяют в онкологии, гинекологии, хирургии, урологии, в частности, при вирусных инфекциях.

Что такое бактериологический посев

Материал, доставленный для анализа в лабораторию, помещают в различные питательные среды, то есть, делают посев. В зависимости от того, возбудителя какой болезни нужно найти, посев делается в разных условиях.

К примеру, рост одного возбудителя возможен в элективной или избирательной среде, но при этом другие микроорганизмы там погибнут.

Такой средой может служить свернутая лошадиная сыворотка, в которой выявляется возбудители дифтерии, или же селенит, желтые соли, в которых определяется присутствие кишечной палочки.

После этого питательные среды перемещают в термостат, в котором поддерживается необходимая температура и влага для роста и размножения бактерий. По истечению определенного времени проводится осмотр бактериальных колоний, именуемых культурой микроорганизмов. Также, возможно и микроскопическое исследование колоний, предварительно окрасив их специальными средствами.

При контрольном осмотре бакпосева лаборант оценивает плотность колоний, цвет, а также, способность разлагать органические и неорганические соединения. Затем подсчитывают количество возбудителей.

Для подсчета используют такую единицу измерения – КОЕ (колониеобразующая единица). КОЕ – это колония микроорганизмов, образовавшаяся из одной клетки микроба.

По этим данным определяется количество микроорганизмов в материале, который исследовался.

Методы подсчета колоний:

• секторный метод;
• метод серийных разведений;
• подсчет единиц колоний под микроскопом.
• Срок готовности результатов посева разный, и зависит от исследуемого материала.

Материал исследования	Срок проведения анализа
1) слизь из носоглотки	от 5 до 7 дней
2) испражнения	от 4 до 7 дней
3) соскоб урогенитального тракта	7 дней
4) общая флора организма	от 4 до 7 дней
5) проверка крови на стерильность	10 дней

Забор материала для проведения анализа на бактериологический посев.

Исследования

Исследования бактериологического посева

Для проведения исследования бактериологического посева берется такие материалы из человеческого организма:

• слизь из носоглотки;
• слизь из зева;
• испражнения (кал);
• слизь уретры;
• мокрота из бронхиального дерева;
• слизь цервикального канала;
• моча;
• кровь;
• секрет простаты;
• грудное молоко;
• спинномозговая жидкость;
• содержимое кист;
• желчь;
• раневое отделяемое;
• содержимое очагов воспаления.

Для получения достоверных результатов, необходимо правильно собрать образцы для анализа. Слизь, кровь или другие элементы необходимо собирать чистыми инструментами и помещать в чистую емкость.

При несоблюдении этих требований произойдет контаминация, которая приведет к размножению бактерий, не имеющих значения для эксперимента, на материале. Поэтому, для взятия нужных образцов, в лабораториях выдают специальную стерильную емкость на руки пациенту.

А забор образцов тканей из различных очагов болезни проводит только медсестра с использованием стерильных инструментов (ложек, петель, шпателей и других).

Сдать анализы на бактериологический посев необходимо до начала антибиотикотерапии. Поскольку, матери для исследования, взяты в период приема антибиотиков, не покажут правильного результата. До забора образцов необходимо выдержать 10 дней после приема антибиотиков.

Необходимо также вовремя доставлять образец в лабораторию, чтобы избежать гибели бактерий от высыхания или изменения среды. Например, образец кала для бакпосева доставляют в лабораторию в теплом виде.

Если необходимо собрать мочу для анализа, то это делают после утренних процедур, и берут только среднюю струю мочи (примерно 15 мл). Материал собирают в стерильную емкость и привозят в лабораторию в течение 2 часов.

При необходимости сдать мазок из зева или носоглотки, то нельзя утром есть, пить и выполнять утренние гигиенические процедуры.

Кал собирают утром, используя стерильные инструменты и емкость. Объем материала должен составлять примерно 20 гр. Кал должен быть чистый, без примесей мочи. Доставляют его не позже чем через 5 часов после дефекации. Также, очень важно собирать кал без использования свечей, клизм и слабительных препаратов.

Кровь для исследования необходимо собирать в период подъема температуры и до приема антибиотиков. Забор проводится в количестве 15 мл для взрослых, и 5 мл для детей.

Сбор мокроты проводится утром, до приема пищи. Ее собирают в специальную емкость во время кашля. Перед забором нужно прополоскать рот и почистить зубы. Такой материал должен оказаться в лаборатории не позже чем через 1 час.

Забор отделяемого половых органов проводится с учетом таких правил: женщины сдают материал по истечению двух недель после менструации, и через месяц после окончания курса антибиотиков. При сборе желательно не ходить в туалет, по-маленькому хотя бы 2 часа. А мужчинам нельзя мочиться в течение 6 часов до сдачи анализа.

Результаты

Результаты бактериологического посева

Результаты бактериологического посева составляет как количественная оценка, так и качественная. То есть, в материале обнаруживают возбудитель инфекции и количество этих микробов.
Определение количественного роста бактерий проводится таким способом: существуют 4 степени роста микробов в материале.

В первой степени микробы медленно растут в жидкой среде, а в твердой их рост вообще останавливается. Вторая же степень подразумевает до 10 колоний одного вида бактерий, образовавшихся в плотной среде. Для 3 степени эти показатели значительно выше – 10-100 колоний, а четвертая насчитывает более 100 колоний.

Это очень важно для результатов исследования и определения возбудителя болезни. Например, при 1 и 2 степени материал не считается зараженным, а всего лишь загрязненным, а при 3 и 4 степени – уже наблюдается возбудитель заболевания.

Точный подсчет важен не только для правильности результата, но и для проведения необходимого лечения.

Какие же бактерии может обнаружить в материале бакпосев? В слизи зева и носоглотки возможно обнаружения гемолитических стрептококков (Streptococcuc pyogenes, Streptococcuc agalactiae), золотистого стафилококка (Staphylococcus auereus), пневмококка (Streptococcuc pneumoniae), дифтерии (Corynebacterium diphtheriae), листерии (Listeria), гемофильную палочку (Haemophilus influenzae типа b) и менингококк (Neisseria meningitidis).

В испражнениях обычно находят группу кишечных бактерий, например сальмонеллу или шигеллу (Salmonella spp., Shigella spp.) , иерсинию (Iersiniae spp.

), условно-патогенные бактерии, анаэробные микробы, тифо-паразитную группу микробов (Salmonella typhi, Salmonella paratyphi A, Salmonella paratyphi B), а также возбудителей пищевых токсических инфекций.

Необходимо проверить испражнения также и на дисбактериоз в кишечнике.

Кровь обычно проверяют на стерильность методом бактериологического посева.

При обследовании слизи половых путей обычно пытаются обнаружить наличие возбудителей инфекций, которые передаются половым путем. Это гонококка, трихомонады, листерия, грибы (Neisseria gonorrhoeae ,Trichomonas vaginalis, грибы рода Candida), уреаплазма (Ureaplasma urealyticum), а также микроплазма и бактериальная флора.

Также, такие образцы для анализа как соскобы, мазки, молоко, кровь, моча, секрет простаты, суставная жидкость, желчь и содержимое ран обследуют и на бактериальную флору, то есть на общую обсемененность.

Что такое антибиотикограмма?

Антибиотикограмма – это перечень препаратов, антибактериального действия, к которым резистентен или чувствителен возбудитель инфекции. Такое исследование чвляется важно частью бактериологического посева, поскольку очень важно определить, какова реакция микробов на то или иное лекарство.

Чувствительностью возбудителя инфекции называют его восприятие медицинского препарата. Это значит, что антибиотик должен каким-то образом повлиять на рост и размножение бактерий.
Резистентностью называют устойчивость микробов к лекарственному средству, это значит, что прием данного препарата не поможет вылечить болезнь.

Антибиотикограмма проводится в такой единице измерения – МИК (минимальной ингибирующей концентрации).

Источник: http://SimptomLecheniye.ru/bakteriologicheskij-posev.html

Бактериологическое исследование

Бактериологическое исследование — это исследование, предназначенное для выделения бактерий и изучения их свойств с целью постановки микробиологического диагноза.

Исследуемый материал следует брать  в  асептических  условиях в стерильную посуду и доставлять в лабораторию возможно скорее. В случае необходимости пробы следует хранить на холоде. Методика взятия проб зависит от объекта, характера заболевания и свойств микроорганизма. Одним из распространенных приемов бактериологического исследования является бактериоскопия.

Для изучения нефиксированных бактерий пользуются двумя методами: раздавленной (между предметным и покровным стеклами) капли и висячей капли. Следует помнить, что препараты нефиксированных бактерий заразны.

Для бактериоскопии фиксированных препаратов используют мазки. Для их приготовления каплю исследуемой жидкости распределяют по поверхности предметного стекла, а затем высушивают. Наиболее распространенным методом фиксации препарата является пронесение его через пламя газовой горелки. В некоторых случаях используют фиксирующие составы.

Фиксированные препараты, как правило, окрашивают (см. Окраска микроорганизмов). К числу важнейших элементов бактериологического исследования относятся посевы и пересевы бактериальных культур, производимые бактериальной петлей или пастеровской пипеткой.

Петлю стерилизуют прокаливанием в пламени, затем ее остужают прикосновением к участку незасеянного агара или ополаскивая в стерильной жидкости. При использовании пастеровской пипетки ее кончик обламывают пинцетом, несколько раз проносят пипетку через пламя горелки и дают остыть. При посевах используют жидкие и твердые питательные среды.

При посеве на скошенный агар культуру бактерий растирают петлей по поверхности агара. При посеве в толщу агарового или желатинового столбика питательную среду прокалывают до дна пробирки петлей или особой иглой. При посеве в жидкую среду надо следить, чтобы жидкость не выливалась и не смачивала края пробирок и пробки.

Важнейшим этапом бактериологического исследования является идентификация — определение видовой или типовой принадлежности бактерий, полученных в виде чистой культуры. При идентификации бактерий производится изучение их физиологических и биохимических свойств, токсинообразования.

Широко используют серологические методы идентификации   бактерий   (реакции агглютинации и преципитации).

Во многих случаях эффективным оказывается биологический метод идентификации микроорганизмов, основанный на заражении лабораторных животных исследуемым материалом или полученной культурой бактерий и выявлении у животных характерных патологических изменений.

Для выделения чистых культур используют механические и биологические методы. Пример механического метода: каплю исследуемого материала растирают одним и тем же стерильным шпателем или бактериальной петлей по поверхности плотной питательной среды, последовательно в первой, второй и третьей чашках Петри.

Выделение чистой культуры производится из выросших отдельных колоний и заключается в их исследовании и отсеве на свежую питательную среду.

Биологические методы выделения чистых культур основаны на учете того или иного свойства выделяемого микроба, отличающего его от других микробов, находящихся в исследуемом материале.

При биологическом методе используют такого рода питательные среды, в которых созданы условия, благоприятные для развития определенного вида микробов. К числу биологических методов относится также заражение лабораторных животных, чувствительных к выделяемому виду бактерий.

В большинстве случаев выращивание продолжают около суток, но в зависимости от вида бактерий бывают необходимы и другие сроки выращивания. Разные виды бактерий нуждаются при выращивании в разных количествах кислорода.

Для поддержания необходимой концентрации кислорода в среде пользуются разнообразными методами аэрации. См. также Питательные среды.

Бактериологическое исследование — комплекс методов для выявления патогенных микроорганизмов у больного, у носителя или на объектах внешней среды.

Бактериологическое исследование может быть использовано для диагностики, профилактики инфекционных заболеваний, для санитарно-гигиенической характеристики среды, окружающей человека, для научного исследования.

Материал и метод бактериологического исследования зависят от цели анализа, условий среды, патогенеза и течения заболевания. При наличии бактериемии микроб обнаруживают при помощи посева крови.

В случаях выраженных местных поражений возбудителя следует искать в отделяемом или выделениях пораженного органа (дифтерия, дизентерия, гонорея и др.).

Выполнение любой из указанных задач осуществляют применением методов, предназначенных для выделения и определения микроорганизмов. В зависимости от характеристики микроба используют весь комплекс методов или его части.

Бактериоскопия — наиболее достунный прием, основанный на микроскопическом изучении материала. При микроскопии свежих препаратов можно пользоваться некоторыми микрохимическими реакциями (например, окраска йодофильных бактерий раствором Люголя) или избирательной окраской разных структурных частей бактерий.

Более четко бактерии можно выявить в окрашенном препарате. Исследуемый материал наносят на предметное стекло тонким и по возможности ровным слоем. Дают препарату высохнуть на воздухе и фиксируют одним из общепринятых методов, но чаще всего фламбированием, т. е.

двух-, трехкратным быстрым проведением препарата над пламенем горелки так, чтобы стекло было теплое, но не горячее. Препарат, остуженный после фиксации, окрашивают простой или дифференциальной окраской (см. Окраска микроорганизмов). При флюоресцентной микроскопии используют как нативные, так и сухие препараты.

В этом случае обработка определенными красителями вызывает свечение структур микробного тела или всего микроба в ультрафиолетовых или коротких синих лучах. В другой модификации микробов обрабатывают специфическими сыворотками, меченными флюоресцентами (красителями).

Бактерии, соответствующие сыворотке, будут светиться, так как на них осядет меченая сыворотка. Гетерологичные бактерии не будут светиться.

Методом бактериоскопии широко пользуются для бактериологической диагностики некоторых инфекционных заболеваний (гонорея, туберкулез, возвратный тиф), а также при изучении всего комплекса микрофлоры органа (миндалины, влагалище), продукта или другого объекта.

Первичный посев производят на обычные среды, благоприятные для данного микроба, на дифференциальные или на селективные среды. Выбор питательной среды (см.

), как и метода предварительной обработки свежего материала для посева, зависит от степени его загрязнения сопутствующей посторонней микрофлорой. Через 24—48 час.

содержания в термостате при оптимальной        для данного микроба температуре чашки рассматривают и подозрительные колонии пересевают на среды, способствующие размножению данного возбудителя. Таким образом получают культуру однородных бактерий, которые и должны быть идентифицированы.

Идентификация микроба начинается с изучения его морфологии в окрашенном препарате и в раздавленной капле (см.) для определения формы микробов и их подвижности. Следующим этапом является исследование ферментативной способности бактерий по расщеплению углеводов, аминокислот, мочевины в определенных для каждого вида сочетаниях. У бактерий наиболее изучены сахаро- и протеолитические ферменты.

Идентификация микроба должна быть дополнена изучением других свойств, характерных для каждого рода и вида микроорганизмов.

К таким свойствам относится способность выборочно растворять эритроциты разных животных (гемолиз), свертывать плазму крови (плазмокоагуляция), растворять сгусток фибрина (фибринолиз) и пр.

Все эти особенности бактерий могут быть использованы при их определении как дифференциальные признаки.

Окончательное определение микробов некоторых видов, в основном патогенных бактерий семейства кишечных, включает серологическую идентификацию (см. Идентификация микробов). Обычно для этого ставят реакцию агглютинации, т. е.

Обычно реакцию агглютинации ставят ориентировочно на стекле и для окончательного определения в пробирках с разведениями сыворотки.

Ряд микробов не удается определить до конца описанным путем. Тогда идентификацию необходимо дополнить заражением лабораторных животных, поскольку для некоторых бактерий характерна патогенность или токсигенность, выявляющаяся при заражении животных. В некоторых случаях заражение животных служит также методом накопления патогенных микробов.

Только сопоставление всех характеристик культуры, собранных при изучении морфологии, биохимических, серологических, а где нужно и биологических свойств ее, может дать основания для идентификации. Ответ при положительном результате исследования не представляет затруднений, если выделенный микроб типичен.

Полезно также подвергнуть культуру атипичных микробов дополнительному изучению другими, более сложными методами.

Отрицательные результаты бактериологического исследования имеют относительное значение и показывают лишь, что в исследованной порции материала искомые микробы не содержались или были нежизнеспособны. Однако они могут присутствовать в другой порции. По этому, например, при обследовании на бациллоносительство (брюшной тиф, дизентерия, дифтерия) требуется проводить повторные исследования.

Источник: http://www.medical-enc.ru/2/bacteriological_issledovanie.shtml

Колонии растущих бактерий стали еще одним видом искусства / бактерии, искусство

Оба вида принадлежат к почвенным бактериям и живут возле корней растений.

Бактерии размером всего в нескольких микрон, и они делятся каждые 20 минут, в конечном счете, образуя большие колонии, состоящие из миллиардов микроорганизмов.

Вся колония может рассматриваться как большой мозг, супер-мозг, который принимает сигналы, обрабатывает информацию, а затем принимает решение о том, куда отправить бактерий и где продолжить свое деление

У себя в лаборатории Бен-Якоб вырастил бактерии в чашках Петри и подверг их влиянию различных условий (например, перепады температуры), чтобы сымитировать изменения в естественной среде обитания. Идея была очень проста: если вы хотите увидеть, на что они способны, то подвергнете их испытанию

Физик мог наблюдать за реакцией колонии на стрессовую ситуацию.

Вместо того, чтобы выращивать бактерии в определенных условиях для научных целей, ученый мог вынуть их из инкубатора на какое-то время, а затем снова положить обратно. Он также, время от времени, добавлял антибиотики и другие вещества в чашки Петри для того, чтобы вызвать физическую реакцию.

Глядя на них, вам кажется, что их мир полон событий

Со временем Бен-Якоб начал понимать поведение бактерий. Как утверждает ученый, “когда вы поймете, как они растут, вы сможете использовать их в качестве материала для творчества”. Чтобы создать необходимую структуру колонии, потребуется ряд ухищрений со стороны ученого.

Для того, чтобы научить бактерии творить, нужно научиться говорить на их языке

Бактерии в природе бесцветны. Чтобы сделать их видимыми, Бен-Якоб использовал краситель Coomassie синий. Благодаря этому красителю бактерии принимали различные оттенки синего в зависимости от плотности каждой отдельной бактерии. Затем, обработав фотографии колоний в Photoshop, ученый раскрашивал их в различные цвета по своему выбору.

Один и тот же объект, представленный в разных цветах, по-разному воспринимается мозгом. В некоторых случаях достаточно просто окрасить колонии, чтобы узнать что-то новое об образовании узоров

Изображения помогли ему понять, как бактерии сотрудничают для решения различных проблем. Когда бактерии в одной части колонии что-то ощущают, то передают сообщение об этом бактериям в других частях колонии. Например, бактерии могут найти еду, рассказать об этом другим, чтобы те тоже пришли покушать.

Узоры «бактериального искусства» Бен-Якова привлекают и завораживают. Если не знаешь, как они сформировались, на ум сразу приходят кораллы, мох сфагнум и перья, а знакомые изгибы становятся чем-то фантастическим.

Бактерии должны поддерживать порядок, но они также должны оставаться гибкими, поэтому при постоянной смене условий, они легче адаптируются к окружающей среде. В этом мире множество явлений, которые также придерживаются комбинации порядка и беспорядка.

Например, классическая музыка. Нас действительно привлекают вещи с подобной организацией

Источник: http://www.qwrt.ru/news/361

Большая Энциклопедия Нефти и Газа

Cтраница 1

Колонии бактерий Рё РІРёСЂСѓСЃРѕРІ ( биоколлоиды) состоят РёР· сотен Рё тысяч клеток Рё отличаются периодичностью строения.  [1]

Колонии бактерий интенсивно разрастаются в нейтральных почвах.

Катодная защита эффективна против них во многих случаях, так как она вызывает образование щелочных зон в контакте с металлом и в некоторых случаях способствует формированию защитных корок.

Р’ общем случае эффективны бактерицидные вещества, которые РјРѕРіСѓС‚ вводиться РІ РІРёРґРµ раствора либо РёРјРё пропитывается песок. Для Р±РѕСЂСЊР±С‹ СЃ этими бактериями РёРЅРѕРіРґР° производится щелочная обработка почвы.  [2]

Колонии бактерий очень разнообразны: слизистые и пастообразные, выпуклые и плоские, крупные и мелкие. У многих видов отмечается внутренняя структура колоний.

Если РёС… рассматривать РІ РјРёРєСЂРѕСЃРєРѕРїРµ РїСЂРё малом увеличении, то РІ РѕРґРЅРёС… случаях можно обнаружить мелкозернистую колонию; РІ РґСЂСѓРіРёС… – ячеистую, напоминающую соты; РІ третьих – колонии РІ РІРёРґРµ мелких комочков или зерен.  [3]

Подсчет числа колоний бактерий может быть произведен через 48 час.  [4]

Р’ начальном состоянии колония бактерий растет СЃРѕ скоростью, пропорциональной числу наличных бактерий.  [5]

Калиненко [28] обнаружил колонии бактерий РЅР° алюминиевых, латунных Рё бронзовых пластинках, погруженных РІ натуральную РјРѕСЂСЃРєСѓСЋ РІРѕРґСѓ, Рё высказал предположение, что эти колонии СѓСЃРєРѕСЂСЏСЋС‚ электрохимические процессы РєРѕСЂСЂРѕР·РёРё металлов. Розенберг Рё Улановский [29] установили, что бактерии РјРѕРіСѓС‚ усиливать РєРѕСЂСЂРѕР·РёСЋ нержавеющей стали РІ РјРѕСЂСЃРєРѕР№ РІРѕРґРµ, уменьшая защитные эффекты катодной поляризации, РЅРѕ РјРѕРіСѓС‚ Рё замедлять РєРѕСЂСЂРѕР·РёСЋ, способствуя образованию осадка СаС03 Рё Mg ( OH) 2 РЅР° поверхности стали.  [6]

Р’ начальном состоянии колония бактерий растет СЃРѕ скоростью, пропорциональной числу наличных бактерий.  [7]

РћР±Р° электрода покрыты колониями бактерий для создания) азличных потенциалов. РќР° анод наносят бактерии Dseudomonas, расходующие кислород, РЅР° катод – СЃРёРЅРµ-веленые водоросли Chlorella, выделяющие кислород.  [9]

РџСЂРё более длительном выращивании колонии бактерий сливаются Рё подсчет затрудняется.  [11]

Развившиеся РЅР° твердой питательной среде колонии бактерий анализируются РїСЂРё помощи описанных выше приемов.  [13]

Шкала РєРѕСЂСЂРѕР·РёРѕРЅРЅРѕР№ стойкости металла.  [15]

Страницы:      1    2    3    4

Источник: https://www.ngpedia.ru/id094693p1.html

Определение общего числа микроорганизмов

Общее микробное число (ОМЧ) – общее число мезофильных аэробных и факультативно анаэробных микроорганизмов, способных образовывать колонии на питательном агаре при t=370в течение 24 часов, видимые с увеличением в 2 раза.

Из каждой пробы воды делают посев не менее двух объёмов по 1 мл. Для этого 1 мл воды вносят в стерильную чашку Петри, заливают 6-8 мл расплавленного и остуженного до 45-460С питательного агара, тщательно перемешивают.

После застывания агара чашки помещают вверх дном и инкубируют при 370С в течение 24 часов. Затем подсчитывают все выросшие на чашке колонии, наблюдаемые при увеличении в 2 раза. Подсчитанное количество колоний на каждой чашке суммируют и делят на 2.

Результат выражают в КОЕ (колониеобразующих единиц) в 1 мл исследованной пробы воды.

Определение общих и термотолерантных колиформных бактерий

Термотолерантные колиформные бактерии обладают всеми признаками общих колиформных бактерий, но, кроме того, способны ферментировать лактозу до кислоты и газа при 440С в течение 24 часов.

Микробиологические и паразитологические показатели

Питьевой воды

(согласно СанПиНу 2.1.4.559–96)

Показатели	Единицы измерения	Нормативы
Общее микробное число 2	число образующих колонии бактерий (колониеобразующих единиц – КОЕ) в 1 мл	не более 50
Общие колиформные бактерии 2	число бактерий в 100 мл	отсутствие
Термотолерантные колиформные бактерии	число бактерий в 100 мл	отсутствие
Колифаги 3	число бляшкообразующих единиц (БОЕ) в 100 мл	отсутствие
Споры сульфитредуцирующих клостридий 4	число спор в 20 мл	отсутствие
Цисты лямблий 3	число цист в 50 л	отсутствие

Примечания: 1 – при определении проводится 2-кратное исследование по 100 мл отобранной пробы воды; 2 – превышение норматива не допускается в 95% проб, отбираемых в точках водоразбора наружной и внутренней водопроводной сети в течение 12 месяцев, при количестве исследуемых проб не менее 100 за год; 3 – определение проводится только в системах водоснабжения из поверхностных источников перед подачей воды в распределительную сеть; 4 – определение проводится только при оценке эффективности технологии обработки воды.

Метод мембранных фильтров

Мембранный фильтр помещают в воронку Зейтца, вмонтированную в колбу Бунзена, которая присоединяется к вакуумному насосу. Воду фильтруют в объёме 333 мл. Затем фильтры Зейтца помещают на поверхность среды Эндо в чашки Петри и после инкубации при 370С в течение суток подсчитывают количество выросших колоний, типичных для БГКП.

Из 2-3 колоний красного цвета готовят мазки, окрашивают по Граму и ставят оксидазный тест, позволяющий дифференцировать бактерии родов Escherichia, Citrobacter и Enterobacter от грамотрицательных бактерий семейства Pseudomonadaceae и других оксидазоположительных бактерий, обитающих в воде.

Для этого фильтр с выросшими на нём колониями бактерий переносят пинцетом, не переворачивая, на кружок фильтровальной бумаги, смоченной диметил-n-фенилендиамином. При наличии оксидазы индикатор окрашивает колонию в синий цвет. 2-3 колонии, не изменившие первоначальную окраску, засевают в полужидкую среду с 0,5% раствором глюкозы.

Посевы инкубируют в течение суток при 370С. При наличии газообразования подсчитывают число красных колоний на фильтре.

Бродильный метод

Засевают 3 объёма воды по 100 мл (для качественного анализа) или при исследовании воды с целью количественного определения общих колиформных бактерий делают посев 3 объёмов по 100 мл, 3 – по 10 мл и 3 – по 1 мл.

Посев 100 мл и 10 мл воды производят в 10 и 1 мл концентрированной лактозо-пептонной среды, посев 1 мл воды – в 10 мл среды обычной концентрации.

Посевы инкубируют при 370С в течение 24-48 часов. Через 24 часа из питательной среды, где отмечено наличие роста и образование газа, делают высев по секторам на среду Эндо, приготовленную с добавлением фуксина.

Результат отрицательный, если

– в среде накопления нет признаков роста,

– на секторах среды Эндо нет роста лактозоположительных колоний,

– на секторах среды Эндо выросли нехарактерные для колиформных бактерий колонии,

– все колонии оказались оксидазоположительными,

– если в подтверждающем тесте на среде с лактозой или маннитом (глюкозой) не отмечено газообразования.

Наиболее вероятное число (НВЧ) бактерий (общих и термотолерантных колиформных бактерий) – вычисляют по специальным таблицам.

Санитарно-микробиологическое состояние воздухазакрытых помещений оценивают по общему микробному числу (ОМЧ) – количеству особей, обнаруживаемых в 1 м3 воздуха, наличию санитарно-показательных бактерий: гемолитических стрептококков, золотистых стафилококков, а также дрожжевых и плесневых грибов.

Согласно СанПиН 2.1.3.1375-03, воздушная среда помещений лечебных учреждений и аптек по уровню бактериальной обсеменённости разделена на 4 класса.

Микробиологические показатели для оценки воздушной среды аптечных учреждений можно определить путём посева воздуха седиментационным (по Коху) или аспирационным методом (в аппарате Кротова).

Допустимые уровни бактериальной обсеменённости воздушной среды помещений лечебных учреждений в зависимости от их
функционального назначения и класса чистоты

Класс чистоты	Название помещений	Санитарно-микробиологические показатели
общее количество микроорганизмов в 1 м3 воздуха (КОЕ/м3)	количество колоний S.aureus в 1 м3 воздуха (КОЕ/м3)	количество плесневых и дрожжевых грибов в 1 дм3 воздуха
до начала	во время работы	до начала	во время работы	до начала	во время работы
Особо чистые (А)	Операционные, родильный зал, асептические боксы для гематологических, ожоговых больных, палата для недоношенных, асептический блок аптек, стерилизационные (чистая половина) боксы бактериологических лабораторий	не более 200	не более 500	не должно быть	не должно быть	не должно быть	не должно быть
Чистые (Б)	Процедурные, перевязочные, предоперационные, палаты реанимации, залы реанимации, детские палаты, комнаты сбора и пастеризации грудного молока, ассистентские и фасовочные аптек, дистилляторная, помещения бактериологических и клинических лабораторий, предназначенные для исследований	не более 500	не более 750	не должно быть	не должно быть	не должно быть	не должно быть
Условно чистые (В)	Палаты хирургических отделений; коридоры, примыкающие к операционным и родильным залам; смотровые, боксы и палаты инфекционных отделений, ординаторские, материальные, кладовые чистого белья	не более 750	не более 1000	не должно быть	не более 2	не должно быть	не должно быть
Грязные (Г)	Коридоры и помещения административных зданий, лестницы, лечебно-диагностические, санитарные комнаты, туалеты, комнаты грязного белья	Не нормируются

Седиментационный метод (по Коху) – оседание микробов под действием силы тяжести – является простым способом изучения микрофлоры воздуха.

Он заключается в том, что чашки Петри со средой оставляют открытыми на определённое время (5-10 минут на общую обсеменённость и не менее 40 минут на кокковую микрофлору), затем их закрывают, маркируют и выдерживают 24 часа в термостате и 24 часа при комнатной температуре.

Количество выросших колоний соответствует степени загрязнённости воздуха: по приблизительному подсчёту на площадь 100 см2 в течение 5 минут оседает столько микробов, сколько их содержится в 10 л воздуха.

Аспирационный метод – более точный количественный метод определения микробного числа воздуха. Посев воздуха осуществляется с помощью приборов.

Аппарат Кротова устроен таким образом, что воздух с заданной скоростью просасывается через узкую щель плексигласовой пластины, закрывающей чашку Петри с питательным агаром.

При этом частицы аэрозоля с содержащимися на них микроорганизмами равномерно фиксируются на всей поверхности среды благодаря постоянному вращению чашки под входной щелью.

После инкубации посева в термостате проводят расчёт микробного числа по формуле:

где N – количество выросших на чашке колоний;

V – объём пропущенного через прибор воздуха, дм3;

1000 – искомый объём воздуха, дм3.

Наличие санитарно-показательных для воздуха микроорганизмов – золотистого стафилококка, гемолитического стрептококка, плесневых грибов, кандид – определяют по характеру выросших колоний на специальных средах (желточно-солевом агаре, кровяном агаре, среде Сабуро) и при микроскопическом изучении бактерий из этих колоний.

Контрольные вопросы

Каковы особенности ферментных систем бактерий? Как регулируется продукция ферментов у бактерий? Какие группы ферментов различают в зависимости от механизма, которым регулируется продукция фермента? Какое практическое значение имеет изучение ферментативной активности бактерий? Методы изучения сахаролитической и протеолитической активности бактерий.

Дифференциально-диагностические среды: перечислите, назовите основные составные части и применение.

Что такое «пёстрый» или «цветной» ряд? Среда Олькеницкого, её состав; как производится посев и как отмечают на этой среде ферментацию разных углеводов, образование сероводорода? Что представляют собой микротест-системы для определения ферментативной активности микробов; как производят посев и как учитывают результаты? Что такое СИБ; как используется эта система, как производится посев и учёт результатов? Укажите основные объекты внешней среды, которые подвергаются санитарно-бактериологическому исследованию. Микробиоценоз, определение понятия. Перечислите и дайте характеристику межвидовых взаимоотношений в микробиоценозах. Какие показатели определяются при бактериологической оценке объектов внешней среды? Санитарно-показательные микроорганизмы: определение понятия. Какими свойствами должны обладать санитарно-показательные микроорганизмы? Перечислите санитарно-показательные микроорганизмы для воздуха, воды, почвы. Микрофлора воды: постоянная микрофлора, источники загрязнения. Показатели для санитарно-бактериологической оценки воды. Методика определения общего микробного числа воды. Показатели фекального загрязнения воды, методы их определения. Укажите предельно допустимые показатели для питьевой воды. Микрофлора воздуха: постоянная микрофлора, источники загрязнения. Показатели для санитарно-бактериологической оценки воздуха, методы их определения. Микрофлора почвы: постоянная микрофлора, её значение для круговорота веществ в природе. Источники загрязнения почвы патогенными микроорганизмами. Показатели для санитарно-бактериологической оценки. Для каких заболеваний факторами передачи могут быть вода, воздух, почва? Некультивируемые формы бактерий: определение понятия, практическое значение.

ЗАНЯТИЕ 9

Источник: https://cyberpedia.su/3xed5f.html