Отличительные черты положительно и отрицательно окрашенных бактерий по граму

Микробиология: Лабораторный практикум, страница 9

6.Раствор
Люголя. 2г KJ растворяют в 5 мл дистиллированной воды и в этот раствор добавляют 1 г йода. Для
ускорения растворения эту смесь растирают в фарфоровой ступке, после чего
доливают водой до 300 мл. Используется при
окраске бактерий по Граму.

Растворы
красителей после изготовления фильтруют, разливают в склянки с притертыми пробками и сохраняют
в темном месте. Для повседневной работы
краски разливают в капельницы с притертыми пробками. Следует учитывать, что при длительном хранении
растворов кристаллы краски могут выпадать в осадок, поэтому препарат
рекомендуется окрашивать через полоску
фильтровальной бумаги.

В лабораторной практике
пользуются простыми и сложными методами окраски
микробных клеток.

При простой окраске на
фиксированный мазок наносят раствор какого-либо
одного красителя, например, разведенного фуксина, который интенсивно окрашивает вегетативные клетки бактерий.

Сущность сложных методов
окраски заключается в том, что препарат окрашивают
не одной, а двумя или большим количеством красок.

Окраска по Граму

Наиболее
широко в микробиологической практике применяется сложный метод окраски по Граму
(пред ложен впервые в 1884 г. датским ученым X. Грамом). Метод является одним из важнейших опознаватель-ных
признаков при определении вида бактерий.

Сущность
метода окраски по Граму заключается в том, что все бактерии по способности
окрашиваться красителями (генциан-виолет или кристаллвиолет с йодом) делятся на
две группы.

Например, роды спорообразующих бактерий – Bacillus, Clostridium,
среди бесспоровых – роды Lactobacillus, Micrococcus, Staphylococcus, Sarcina, Leuconostok и др.

К другой группе относятся
виды, которые не способны удерживать красящий комплекс и обесцвечиваются при
обработке спиртом. Их называют грамотрицательными
(грам-). К числу их принадлежат многие виды неспорообразующих
палочковидных бактерий, в т.ч. роды Pseudomonas,
Escherichia, Salmonella, Proteus и др.

Способность или неспособность
клеток удерживать красящий комплекс в настоящее время связывают с химическим
составом и структурой клеточных стенок
бактерий. В оболочках грам + бактерий содержится больше гликопептида муреина, полисахаридов и тейхоевые
кислоты.

Они имеют достаточно плотную многослойную структуру. В клетках
грам + бактерий генциан-виолет и йод
образуют прочное соединение с цитоплазмой, которое не извлекается
спиртом.

Они сохраняют фиолетовый цвет генциан виолета и при дополнительном окрашивании фуксином Пфейффера.

Оболочки
грам-бактерий однослойны, в них отмечено высокое содержание липидов в виде
липопргеидов и липополисахаридов. Грам-бактерии при обработке спиртом
обесцвечиваются, т.к. у них генциан-виолет не фиксируется в цитоплазме. При
дополнительном окрашивании фуксином клетки бактерий окрашиваются только в
бледнорозовый цвет.

Грам + отличаются от грам –
не только своим отношением к окраске, но и рядом биологических свойств и
особенностей. Большинство грам + видов обладают
повышенной устойчивостью к обезвоживанию, термической обработке,
радиоактивным и другим типам излучений. В тоже время грам -бактерии более устойчивы к действию щелочей и
протеолитических ферментов, а также
антибиотиков.

Следует учитывать,
что некоторые виды бактерий будучи грам + в молодом возрасте, в старых культурах
не все интенсивно красятся по Граму.

Поэтому для
окраски следует брать односуточные или двухсуточные культуры и, кроме того,
пользоваться для сравнения контрольными культурами (стандартами), отношение которых к окраске по Граму заранее
известно.

Источник: https://vunivere.ru/work2000/page9

Окраска по Граму | Андромед

Подробности Просмотров: 10579

Ганс Кристиан Йоахим Грам (дат. Hans Christian Joachim Gram ; 13 сентября 1853 — 14 ноября 1938) — датский бактериолог. Родился в семье Фредерика Теркеля Юлиуса Грама, профессора юриспруденции и Луизы Кристины Рулунд.

Грам изучал ботанику в Университете Копенгагена и был ассистентом ботаники у зоолога Япетуса Стенструпа. Работа с растениями позволила ему узнать основы фармакологии и научиться пользоваться микроскопом. Он поступил в медицинскую школу в 1878 году и закончил её в 1883.

Между 1878 и 1885 годами Грам путешествовал по Европе. В Берлине, в 1884, он разработал метод разделения двух основных классов бактерий. Эта техника, Метод окраски Грама, продолжает оставаться стандартной процедурой в медицинской микробиологии.

Окраска по Граму основана на различиях в строении клеточной стенки прокариот. Грамположительные бактерии имеют толстую, прочную, просто устроенную стенку (толщина более 50 нм)  Основным компонентом клеточной стенки этих бактерий является многослойный пептидогликан (муреин), построенный их остатком N-ацетил мурамовой кислоты.

Прочность линейному полимеру придают поперечные тетрапептидные сшивки, соединяющие отдельные слои пептидогликана. С петидогликаном клеточной стенки грамположительных бактерий ковалентно связаны тейхоевые или  липотейхоевые кислоты (от греч.

teichos – стенка), молекулы которых представляют собой цепи из 8-50 остатков глицерола  и рибитола, соединенных фосфатными мостиками.  Молекулы тейхоевых кислот являются рецепторами адгезии (адгезинами), специфическими антигенами многих бактерий.  С пептидогликаном могут быть связаны белки (А, М, Т, R и др.

), которые располагаются снаружи также кластерами.  Эти белки являются антифагинами, репелентами фагоцитоза, рецепторами для антител. Смесь S.aureus и E.coli

Над слоем муреина располагается периплазматическое пространство, играющее важную роль в обменных процесса (периплазматические ферменты) Далее располагается наружная мембрана, которая имеет строение, характерное для биологических мембран.

  Внешний листок наружной мембраны содержит липополисахарид (ЛПС), состоящий из трех компонентов: липида А, стержневой (базисной) части, или ядра,  и полисахаридной цепи, образованной повторяющимися олигосахаридными последовательностями. 

Основной краситель интенсивно связывается муреиновым слоем. Поскольку этот слой у грамотрицательных бактерий очень тонкий и экранируется внешней мембраной, эти микроорганизмы сорбируют значительно меньше красителя, чем грамположительные. 

Йод образует с красителем и муреином сложный комплекс, который труднее вымывается обесцвечивающими растворами. Дифференцирующие растворы вымывают весь краситель из клеточной стенки грамотрицательных бактерий, в то время, как грамположительные еще содержат достаточное количество красителя. 

Дополнительный краситель докрашивает обесцвеченные грамотрицательные бактерии в контрасный цвет.

1. На фиксированный мазок положить кусочек фильтровальной бумаги и нанести с избытком основной краситель (1-2 мин)
2. Слить краситель, промыть препарат водой, нанести раствор Люголя. (1-2 мин)
3. Слить раствор Люголя, препарат поместить в спирт (или налить спирт на препарат). (30-60 сек)
4. Тщательно промыть дистиллированной водой.
5. Докрасить одним из дополнительных красителей. (1-2 мин)
6. Промыть и подсушить препарат

1. На фиксированный мазок нанести основной краситель (1 мин)
2. Слить краситель, промыть препарат водопроводной водой (не более 2 сек) 
3. Поместить препарат в раствор Люголя (1 мин)
4. Промыть водопроводной водой и тщательно высушить 
5. Препарат поместить в спирт и обесцвечивать, слегка покачивая. Тщательно высушить
6. Докрасить одним из дополнительных красителей (10 сек)
7. Промыть и подсушить препарат

1. Мазок высушивают на воздухе без нагревания. Не фиксируют
2. Окраска основным красителем. На мазок наливают раствор а и добавляют 2-3 капли раствора b. (2-3 мин) 
3. Смывают раствором Люголя. Наливают на мазок раствор Люголя (2 мин или более)
4. Промыть водопроводной водой и осторожно удалить избыток воды фильтровальной бумагой (не сушить)
5. Обесцветить, добавляя по каплям смесь ацетона и эфира до прекращения отхождения красителя (обычно около 10 сек)
6. Препарат высушить на воздухе.
7. Докрасить дополнительным красителем. (5-10 сек)
8. Промыть и подсушить препарат

1. Мазок высушивают на воздухе без нагревания. Не фиксируют
2. Окраска основным красителем. Растворы а и b смешивают в соотношении 15:4. Наносят на мазок (5 мин и более)  
3. Смывают раствором Люголя. Наливают на мазок раствор Люголя (2 мин или более)
4. Стряхнуть избыток раствора Люголя. Не промывать
5. Обесцветить, добавляя по каплям смесь ацетона и эфира до прекращения отхождения красителя (обычно около 10 сек)
6. Препарат высушить на воздухе.
7. Докрасить дополнительным красителем. (1-2 мин)
8. Промыть и подсушить препарат

1. На фиксированный мазок наложить фильтровальную бумагу с основным красителем. Нанести сверху несколько капель воды (1 мин)
2. Стряхнуть основной краситель. Налить на препарат раствор Люголя. (1 мин)  
3. Стряхнуть раствор Люголя. Не промывать
4. Препарат поместить в спирт и обесцвечивать, слегка покачивая (или нанести спирт на мазок).
5. Тщательно промыть дистиллированной водой.
6. На препарат положить фильтровальную бумагу с дополнительным красителем. Нанести несколько капель воды.(1 мин)
7. Промыть и подсушить препарат

1. На фиксированный мазок нанести основной краситель (1 мин)
2. Слить краситель, промыть препарат водопроводной водой (не более 2 сек)  
3. Поместить препарат в раствор Люголя (1 мин)
4. Промыть водопроводной водой и тщательно высушить
5. Препарат поместить в спирт и обесцвечивать, слегка покачивая. Тщательно высушить
6. Докрасить одним из дополнительных красителей (10 сек)
7. Промыть и подсушить препарат

Ошибки

Грамположительные бактерии окрасились в красный цвет

ПричинаРешение

Мазок переобесцвечен (самая частая ошибка)	Приготовить новый мазок и повторить окраску, уменьшив время обработки обесцвечивающим раствором Просмотреть много полей зрения в испорченном мазке. Иногда удается найти подходящие Если нет возможности приготовить новый мазок, полностью обесцветить имеющийся, тщательно промыть водой, высушить и повторить окраску
Старая культура	Окраска по Граму учитывается для суточных культур (для медленно растущих бактерий – через двое-трое суток). При длительном хранении на питательной среде наблюдается дегенарация муреинового слоя. Используйте культуру подходящего возраста
Культура выращена в неблагоприятных условиях	При выращивании на селективных средах может образовываться слишком тонкий муреиновый слой Культивируйте микроорганизм на полноценной среде
Особенности строения клеточной стенки (грамвариабельные бактерии)	нет

Грамотрицательные бактерии окрасились в синий цвет

ПричинаРешение

Слишком густой мазок или наличие конгломератов (например, при аутоагглютинации)	Краситель удерживается не клеточной стенкой, а за счет капиллярности пространств между клетками в скоплении Просмотреть много полей зрения, возможно в препарате есть поля зрения с нормальной “густотой” мазка Повторить приготовление препарата, взяв меньше культуры и приготовив мазок на большей площади При аутоагглютинации культуры взять для приготовления мазка дистиллированную воду
Мазок плохо обесцвечен	Просмотреть много полей зрения, возможно в препарате есть поля зрения с нормальным обесцвечиванием Повторить приготовление препарата и его окраску Дообесцветить имеющийся мазок Проверить правильность приготовления обесцвечивающего раствора. При повторении ошибки – заменить раствор.
Особенности строения клеточной стенки (грамвариабельные бактерии)	нет

Источник: http://andromed.spb.ru/index.php/laboratornyj-praktikum/83-okraska-po-gramu

Грамотрицательные бактерии

Еще в 1884 году датский медик Грам изобрел особый метод изучения природы происхождения и некоторых особенностей микроорганизмов. Суть его заключается в окрашивании бактерий раствором особого состава.

Основные виды грамотрицательных бактерий

Одна из разновидностей бактерий, которая дифференцируется с помощью метода Грама, – грамотрицательные микроорганизмы. Особенность бактерий в том, что во время исследования они не окрашиваются в фиолетовый цвет.

Как и любые другие бактерии, они могут подолгу жить в организме, при этом никак не проявляя себя. Но воспользоваться первой же удачной возможностью, чтобы начать размножение, грамотрицательные микроорганизмы не преминут.

Подвидов вредоносных микроорганизмов существует очень много. К грамотрицательным бактериям относятся:

• легионеллы;
• бруцеллы;
• спеирохеты;
• псевдомонады;
• франциселлы;
• протеобактерии (среди которых и известная E Coli);
• бордетеллы и многие другие.

Эти микроорганизмы могут провоцировать проблемы с дыханием, работой сердечно-сосудистой системы и желудочно-кишечного тракта. В мазках пациентов могут находиться и грамотрицательные анаэробные бактерии – особо опасные микроорганизмы. Самые известные представители группы:

• палочки;
• вибрионы;
• менингококки;
• хламидии;
• спирохеты;
• спириллы;
• гонококки;
• хеликобактерии.

Лечение грамотрицательных бактерий

Даже с теми бактериями, которые опасности для жизни не представляют, бороться нужно. Как показала практика, эффективнее всего с грамотрицательными микроорганизмами борются сильнодействующие антибиотики.

Так, например, бактерию E Coli и энтерококки можно уничтожить с помощью ампициллина или амоксициллина. В лечении грамотрицательных бактерий хорошо зарекомендовали себя и антибиотики-цефалоспорины (некоторые поколения в – большей степени, некоторые в – меньшей).

Подобрать по-настоящему эффективное лечение можно только после того, как будет определен точный вид бактерии, поразившей организм. Причем чем раньше это будет сделано, тем лучше. Зачастую вредное соседство обнаруживается только на анализах.

Поэтому-то специалисты и рекомендуют проходить регулярные комплексные обследования.

Источник: https://womanadvice.ru/gramotricatelnye-bakterii

ПОИСК

    Макролидные антибиотики подавляют рост грам-положительных бактерий, в том числе пенициллин-резистентных штаммов стафилококков и микоплазм, грам-отрицательных кокков, спирохет, больших вирусов и простейших. [c.

314]

    Форма клеток (круглая, короткая или длинная, прямая или изогнутая палочка, короткие или длинные нити, вибрион, спириллы, спирохета) 2) характер взаимного расположения клеток (одиночные клетки, соединенные попарно, цепочки, тетрады, сарцины) размеры клеток (диаметр у кокков, длина и толщина у других форм — в микронах) форма конца клеток (закругленная, срезанная под прямым углом, вогнутая, заостренная капсула (имеется, размер, отсутствует) движение бактерий и расположение жгутиков (полярное, биполярное, по всей поверхности. Полярные жгутики одинарные или в виде пучков) образование зооглеи инволюционные формы (наличие и их форма веретенообразные, клинообразные, нитевидные, ветвистые или другие) наличие спор, их форма (круглая, эллипсовидная, веретенообразная, продолговатая), размеры (средняя величина, диаметр равен диаметру клетки или больще), расположение (центральное, полярное) тип прорастания (экваториальное, косое, полярное), оболочка (толстая, тонкая) окрашивание по Граму (положительное, отрицательное). [c.66]

    Окрашивание по Граму. Клеточная стенка, по-видимому, ответственна также за окрашивание по Граму. Способность или, наоборот, неспособность окрашиваться в темно-фиолетовый цвет при использовании метода, предложенного в 1884 г. Грамом, служит важным таксономическим признаком, с которым коррелируют другие свойства бактерий. Процедура окрашивания по Граму начинается с обработки фиксированных бактериальных клеток основным красителем кристаллическим фиолетовым. Затем следует обработка раствором иода. Иод образует с кристаллическим фиолетовым комплекс, нерастворимый в воде и плохо растворимый в спирте и ацетоне. После этого клетки дифференцируют , обрабатывая их спиртом грам-положительные клетки удерживают при этом комплекс краситель—иод и остаются синими, а грам-отрицательные обесцвечиваются. Для того чтобы сделать их видимыми, их дополнительно окрашивают контрастным красителем фуксином. [c.50]

    Кристаллическое вещество, растворимое в воде, не растворимое в эфире, хлороформе и ацетоне.

Действует против целого ряда бактерий, относящихся к грам-положительной и грам-отрицательной группам, включая кислотоустойчивые бактерии, а также против спирохет.

Имеются многочисленные данные о том, что стрептомицин оказывает благоприятное влияние при лечении некоторых форм туберкулеза. [c.428]

В общем случае грам-отрицательные микроорганизмы устроены более сложно, чем грам-положительные.

Доступ к восстановительным областям облегчен, если микроорганизм имеет экзоферменты, но становится все труднее в ряду периплазматические ферменты – цитоплазматические ферменты-митохондрии в эукариотических клетках. Многие бактерии [c.250]

    Тетрациклины — антибиотики широкого спектра действия. Они активны в отношении грам-отрицательных и грам-положительных бактерий, риккет-сий, некоторых крупных вирусов и простейших.

Механизм антимикробного действия тетрациклинов основан на ингибировании ими биосинтеза белка микробной клетки. [c.304]

    В структурном плане интересны дисульфидные антибиотики голомицин и тиомутин, последний из которых обладает разнообразной активностью он эффективен против грам-положительных и грам-отрицательных бактерий, грибов и амебных паразитов. [c.320]

    После того как химиотерапевтические свойства пенициллина были продемонстрированы, во всем мире начались поиски антибактериальных средств на основе микроорганизмов.

Из этих вод он выделил гриб, подобный СеркаШзрогит асгетоп шт, который при выращивании на агаре выделял вещество, ингибирующее рост ряда грам-положительных и грам-отрицательных бактерий [4]. [c.337]

    Культура этого организма была послана в Оксфорд к Флори. Абрахам и Ньютон выделили из этого организма несколько антибактериальных веществ, из которых главное, ответственное за наблюденный Броцу эффект, оказалось пенициллином N (16).

Авторы отметили, однако, наличие другого вещества с умеренной антибактериальной активностью против грам-положительных и грам-отрицательных бактерий, которое было устойчиво к действию пе-нициллиназ.

Это вещество, названное цефалоспорином С (2а), стало предшественником другого важного семейства антибиотиков с р-лактамной группировкой — цефалоспорииов (2) [5]. [c.337]

    Главная антибактериальная активность полученных путем ферментации пенициллинов направлена против грам-положительных бактерий, за исключением пенициллина N (16), который проявил обнадеживающую активность против грам-отрицательных бактерий.

Этот неожиданный для пенициллинов антибактериальный спектр связан, по-видимому, с присутствием в боковой группе свободной аминной функции, поскольку после ацилирования активность против грам-отрицательных бактерий существенно снижается, [c.

343]

    Тиенамицин (34) выделен из Streptomy es attleya и он оказался активным как против грам-положительных, так и против грам-отрицательных бактерий [57]. Его неустойчивость в водном растворе может, однако, помешать использованию в клинике. [c.364]

Клеточная стенка может быть построена только из белковых макромолекул или гетерополисахаридов. Окрашивание по Граму отрицательное или положительное. Большинство — строгие анаэробы. Многие имеют жгутики. Характеризуются экологическим и метаболическим разнообразием, способностью жить в экстремальных условиях.

Объединены в класс АгсЬаеоЬас1ег1а [c.159]

    Если после окрашивания по Г раму обработать грам-положительные клетки лизоцимом, протопласты остаются окрашенными, однако под действием спирта они обесцвечиваются. Прорастающие споры Ba illus subtilis и первые генерации клеток после прорастания спор ведут себя как грам-отрицательные организмы. Лишь позднее они становятся [c.50]

    Муреиновый мешок выполняет функцию опорного каркаса клеточной стенки. На нем откладываются и его инкрустируют различные другие вещества. По строению этого каркаса, а также по содержанию других веществ в клеточной стенке грам-положительные бактерии отличаются от грам-отрицательных. [c.53]

    Антибиотик пенициллин действует главным образом на грам-положительные бактерии (стафилококки и пневмококки а т Щ торые грам-отрицательные клетки (гонококки, менингококки, энтеробактерии), убивая их.

Однако его бактерицидному действию подвержены только растугцие бактерии нерастущие, покоящиеся клетки остаются незатронутыми.

Самый примечательный феномен, наблюдаемый при воздействии пенициллина,-это появление так называемых L-форм, которые образуются из нормальных бактериальных клеток в результате несбалансированного роста в длину и в толщину. При этом исходные палочковидные клетки увеличиваются в объеме во много раз (см. разд.

3.19). На агаризованных питательных средах такие гигантские клетки могут некоторое время сохранять жизнеспособность. Если воздействовать пенициллином на растущие клетки в гипотоническом растворе, то они лопаются. В изо- и гипертонических средах палочки превращаются в шаровидные образования (рис. 2.

    Еще одну группу окислительно-восстановительных систем в дыхательной цепи составляют хиноны. Во внутренней мембране митохондрий и у грам-отрицательных бактерий имеется убихинон (кофермент Q рис. 7.9, В), у грам-положительных бактерий-нафтохиноны, а в хлоропластах-пластохиноны, Хиноны, в частности убихинон, липофильны и поэтому локализуются в липидной фазе мембраны.

Они способны переносить водород или электроны. Перенос может осуществляться в два этапа, при этом в качестве промежуточной формы выступает се-михинон. По сравнению с другими компонентами дыхательной цепи хиноны содержатся в 10-15-кратном избытке. Они служат сборщиками водорода, поставляемого различными коферментами и простетические ми группами в дыхательной цепи, и передают его цитохромам.

 [c.238]

    Методы выявления антибиотиков. Первые антибиотики были обнаружены случайно, по образованию зон подавления роста.

Видами-индикаторами (тест-объектами) в таких опытах служат типичные представители различных групп микроорганизмов. Для качественного испытания продуцента антибиотика достаточно посеять его в середину чашки с питательным агаром, а индикаторные бактерии-в виде радиальных штрихов [штрих-тест, рис. 10.5).

После инкубации по степени торможения роста различных индикаторных организмов судят о спектре действия антибиотика. Антибиотики различаются по действию на грам-положительные и грам-отрицательные бактерии, на дрожжи, дерматофиты и другие микроорганизмы. [c.338]

    Грамицидин представляет собой кристаллический полипептид, растворимый в воде и мало растворимый в эфире свободные аминогруппы и карбоксильные группы в грамицидине отсз тствуют. При расщеплении молекулы грамицидина образуются фрагменты, состоящие из /-триптофана, d-лейцина, аланина и аминооксикис-лоты неустановленного строения.

Служит для нару кного применения. [c.426]

    В первых работах делались попытки сопоставить нуклеотидный состав ДНК с каким-либо одним, отдельно взятым, также существенным признаком, например со способностью окрашиваться положительно или отрицательно по Граму, с адаптацией к аэробным или анаэроб-аым условиям существования, с наличием или отсутствием патогенности и т. д. Еще ]Ли и соавт. (Ьее е1 а1., 1956) отметили отсутствие какой-либо определенной связи состава ДНК с принадлежностью бактерий к грамполо- ительной или грамотрицательной группам обе эти груп-1Ы включают в себя виды как с АТ-, так и с ГЦ-типом ДНК. То же самое было отмечено в отношении аэробов I анаэробов. Почти одинаковыми показателями специфич-юсти состава ДНК характеризуются бактерии родствен-шх патогенных и сапрофитных видов, гемолитические [c.7]

    Херрманн и Прейс нашли, что эти вещества обладают бактерицидным действием по отношению к грам-положительным и грам-отрицательным бактериям. [c.515]

    Проводимые в настоящее время исследования показывают возможность констру-рования сенсоров на основе как грам-положительных, так и грам-отрицательных [икроорганизмов, причем либо строго аэробных, либо факультативно анаэробных (см. абл. 17.1). Некоторые описанные выше преимущества и недостатки микроорганизмов [c.241]

    Что до возможности дифференциации и идентификации клеток по частотной зависимости их диэлектрических свойств, ясно, что наряду с другими отличиями различные бактерии имеют разные размеры и поверхностные заряды (плотности зарядов).

Например, грам-положительные и грам-отрицательные бактерии характеризуются совершенно различными а-дисперсиями [95].

Однако размеры и поверхностные заряды микроорганизмов сильно завися как от pH, так и от их физиологического состояния (например, скорости роста), поэтому маловероятно, чтобы простые диэлекг- [c.357]

    Единственная общая методика для подсчета определенной группы микроорганизмов заключается в проведении диагностического теста на образовавщиеся колонии.

Например, бактерии семейства Pseudomonada eae можно отличить от ряда других групп грам-отрицательных бактерий с помощью оксидазного теста, на который псевдомонады дают положительную реакцию.

Даубнер и Петер [57] показали, что для колоний, выросших на мембранных фильтрах, можно провести оксидазный тест, если поместить мембрану, содержащую полностью проросшие колонии, на фильтровальную бумагу, насыщенную ок-сндазным реагентом. Колонии, дающие при этом положительную реакцию, становятся окрашенными в голубой цвет, что и проявляется в течение 1—2 минут. [c.251]

    Уже более полувека бактерии классифицируют на фам-положительные и грам-отрицательные в зависимости от их реакции на окраску по Граму. Основа этого эмпирически найденного различия стала теперь понятной. Указанные классы бактерий различаются по типу клеточной оболочки (рис. 322). Плазматическая мембрана грам-положителъных бактерий окружена массив- [c.218]

Источник: http://chem21.info/info/1411823/

Биология и медицина

В зависимости от строения клеточной стенки прокариоты , относящиеся к эубактериям , делятся на две большие группы. Было обнаружено, что если фиксированные
клетки эубактерий обработать сначала кристаллическим фиолетовым, а затем
йодом, образуется окрашенный комплекс.

При последующей обработке спиртом в
зависимости от строения клеточной стенки судьба комплекса различна: у так
называемых грамположительных видов этот комплекс удерживается клеткой, и последние остаются
окрашенными, у грамотрицательных видов, наоборот, окрашенный комплекс вымывается из клеток, и они
обесцвечиваются. (Этот способ был впервые предложен в 1884 г.

датским
ученым Х.Грамом (Ch.Gram), занимавшимся окрашиванием тканей. Позднее он был
использован для бактерий).

У некоторых эубактерий положительная реакция при окрашивании описанным
выше способом свойственна только клеткам, находящимся в стадии активного
роста.

Выяснено, что окрашенный комплекс образуется на протопласте , но его удерживание клеткой или вымывание из нее при последующей
обработке спиртом определяются особенностями строения клеточной стенки.

Окрашивание препаратов увеличивает чувствительность микроскопии, так как
неокрашенные бактерии плохо различимы даже при увеличении в 400-1000.

Наиболее распространена дифференциальная окраска по Граму, хотя применяют
и монохромные окраски.

Основный краситель (например, кристаллический фиолетовый) прочно
фиксируется в стенке грамположительных бактерий, придавая им иссиня-черный
цвет, и легко вымывается спиртом (или ацетоном) из стенки грамотрицательных
бактерий, после чего они докрашиваются контрастным красителем (например,
сафранином) в красный цвет.

Окраска по Граму незаменима при исследовании мазков мокроты. Если мокрота
получена правильно, в ней обнаруживают не менее 25 нейтрофилов и менее 10
эпителиальных клеток в поле зрения при малом увеличении. Большее количество
эпителиальных клеток и разнообразие типов бактерий свидетельствуют о том,
что мокрота загрязнена содержимым ротоглотки.

Хотя отличить нормальную
микрофлору от патогенных бактерий нередко бывает трудно, окраска мазка по
Граму дает ценную информацию, если патогенная бактерия имеет какой-либо
доступный определению признак ( биологический сигнал ). Например, при бактериальном вагинозе в мазке из влагалища видны эпителиальные клетки, усеянные
грамположительными бактериями.

Окраску по Граму используют также для выявления бактерий и лейкоцитов в
СМЖ, синовиальной, плевральной и перитонеальной жидкости. Нижний предел
чувствительности метода составляет 10000 бактерий на 1 мл.

Чтобы увеличить чувствительность, исследуемую жидкость центрифугируют и
готовят окрашенный мазок осадка. Эта процедура называется обогащением
материала. Она проста и особенно ценна для выявления бактерий и лейкоцитов
в СМЖ и кислотоустойчивых бактерий в мокроте.

Ссылки:

Все ссылки

Источник: http://medbiol.ru/medbiol/microbiol/000a8890.htm

Чем отличаются грамотрицательные и грамположительные бактерии?

В результатах анализов и в инструкциях к лекарственным препаратам часто встречаются такие понятия, как грамположительные и грамотрицательные бактерии. Чтобы выяснить разницу между двумя этими терминами, нужно познакомиться ближе как с самими бактериями, так и с лабораторными методами их исследования.

Зачем нужны понятия грамположительности и грамотрицательности

Известно, что бактерии относятся к микроорганизмам – представителям живого мира, имеющим настолько маленькие размеры, что это делает их невидимыми для невооруженного глаза.

Использование микроскопа в какой-то мере решило эту проблему – под определенным увеличением даже самые маленькие бактерии становятся доступными для идентификации и подсчета их количества.

Таким решением стал метод окрашивания бактерий по Граму. Именно от названия этого лабораторного исследования и произошли термины «грамотрицательный» и «грамположительный».

Метод определения «грамположительности» и «грамотрицательности»

По строению клеточной стенки все бактерии делятся на два типа: имеющие дополнительную внешнюю мембрану и те, в которых такая мембрана отсутствует.

При анализе образца, взятого для исследования микрофлоры (мазка из влагалища, уретры, зева и пр.), в него добавляется специальный краситель. Это вещество окрашивает бактерии, не имеющие внешней мембраны, в фиолетовый цвет. Но внутрь микроорганизмов с внешней мембраной краситель не проникает, и они остаются бесцветными.

После этого цвет бактерий фиксируется йодистым раствором, затем следует промывание обесцвечивающим составом – и у микроорганизмов без внешней мембраны фиолетовый цвет меняется на синий. А при добавлении в образец контрастного вещества окрашиваются и клетки, имеющие дополнительную мембрану, – они становятся розовыми или красными.

Такой метод классификации по строению клеточной стенки бактерий называется окрашиванием по Граму. Соответственно, бактерии, изменившие цвет при первом окрашивании, относятся к грамположительным, а отреагировавшие лишь на контрастное вещество – к грамотрицательным.

Значение грамположительных и грамотрицательных бактерий для здоровья человека

Строение клеточной стенки у бактерий имеет не только лабораторное значение. Установлено, что существенная часть микроорганизмов, которые являются для человека патогенными, вызывающими различные заболевания, относятся к грамположительным.

Кроме того, наличие или отсутствие внешней мембраны определяет чувствительность бактерии к антибиотикам, что имеет критическое значение при лечении инфекций.

По результатам анализов на грамотрицательную и грамположительную микрофлору становится возможным сделать правильный выбор антибактериального препарата, который будет максимально эффективен в конкретном случае.

Грамположительные и грамотрицательные представители влагалищной микрофлоры

Влагалищная среда включает в себя представителей и грамположительных, и грамотрицательных бактерий. Находясь в правильном соотношении, они поддерживают здоровую микроэкологию влагалища, защищают его от инфекций и имеют способность к саморегуляции – у здоровой женщины количественный и качественный состав влагалищной микрофлоры поддерживается иммунной и нервной системой.

В вагинальных выделениях здоровой женщины могут присутствовать следующие виды микроорганизмов:

• грамположительные палочки Lactobacillus species, Bifidobacterium species, Eubacterium species, Clostridium species идр.;
• грамположительные кокки Staphylococcus aureus, Peptococcus species и др.;
• грамотрицательные палочки Escherichia coli, Gardnerella vaginalis и пр.;
• грамотрицательные кокки Acidominococcus fermentas, Veillonella species.

Условно-патогенные микроорганизмы в составе влагалищной микрофлоры являются безопасными для здоровья женщины, но ровно до тех пор, пока их рост и активность сдерживаются другими – полезными бактериями.

К наиболее важным из них относятся лактобактерии, которые представляют собой доминирующий вид микроорганизмов во влагалищной среде.

В здоровой микрофлоре они составляют 95–98 % от общего количества бактерий и играют важную роль в регуляции роста патогенов.

Более того, в процессе своей жизнедеятельности они продуцируют подобные антибиотикам вещества, губительные для многих бактерий, попадающих на слизистую влагалища из окружающей среды.

Таким образом, поддержание количества лактобактерий на нужном уровне является одной из первостепенных задач для сохранения здоровья женщины.

Если баланс грамположительных и грамотрицательных бактерий нарушен

При дисбалансе интимной микрофлоры врач может назначить медикаментозную поддержку в виде пробиотических препаратов, одним из которых является Лактонорм®. При курсовом использовании он способствует заселению слизистой оболочки влагалища лактобактериями. За счет вагинального применения препарат обеспечивает их направленное поступление без количественных потерь.

Вагинальные капсулы Лактонорм® имеют размер не более 2 см, поэтому удобны в применении. В отличие от свечей они практически не тают в руках, не вытекают и не оставляют следов на нижнем белье.

Источник: http://lactonorm.ru/stati/chem-otlichayutsya-gramotricatelnye-i-grampolozhitelnye-bakterii.php

Грамотрицательные бактерии, их строение и заболевания

Домой (home) => Бактерии => Грамотрицательные бактерии, их строение и заболевания

Царство микроорганизмов необыкновенно интересно и сложно устроено. Например, существуют микробы, которые выживают и размножаются, если перед этим их несколько суток подряд кипятить.

Другие погибают, если на питательную среду добавляется обычный сахар. Как разобраться в этом паноптикуме миниатюрных живых существ, несущих не только жизнь, но и смерть?

Очень просто: покрасить!

Ганс Христиан Грам достоин памятника

Дания дала миру удивительного человека, почти полную тёзку великого сказочника Андерсена. Но Грам не сочинял сказок.

Мировую известность ему принес его знаменитый метод окраски микроорганизмов, по которому все царство бактерий можно разделить на две большие группы: грамположительные и грамотрицательные бактерии.

Особенности строения грамположительных и грамотрицательных бактерий «в двух словах» объясняется так:

• грамположительные бактерии образуют споры, экзотоксины, имеют оболочку, легко проницаемую для антибиотиков и окрашиваются в синий цвет анилиновым красителем;
• грамотрицательная флора не образует спор, «вооружение» и толщина клеточной стенки у них толще, они образуют эндотоксины, и «достать» эту флору лекарствами гораздо труднее. Окрашиваются в красный цвет фуксином, после удаления анилинового красителя.

Те, кто окрашивается положительно, способны удерживать анилиновый краситель, и его «нельзя отмыть».

Это спорообразующие кокки, клостридии, бациллы, коринебактерии они прокрашиваются в красно – фиолетовый цвет.

Клеточная стенка грамотрицательных бактерий неспособна удержать комплекс анилинового красителя, он легко вымывается, и эти микробы хорошо воспринимают последующее окрашивание в синий цвет.

О строении клеток грамотрицательной флоры

Строение грамотрицательных бактерий более «солидное» и «пуленепробиваемое», чем у кокков. Это объясняется тем, что клеточная стенка у грамотрицательной флоры более мощная, и толстая. Она успешно противостоит влиянию антител и лекарств, поэтому многие виды грамотрицательных бактерий стали настоящей проблемой для клинических фармакологов и разработчиков антибиотиков.

У этих микроорганизмов есть внешняя капсула, или липополисахаридная мембрана, которая оказывает на организм человека вредное действие. Этот слой является источником эндотоксинов, то есть веществ, которые выходят наружу при разрушении микробной клетки. Эндотоксины являются сильными индукторами воспаления, провоцируя иммунный ответ.

Где встречается грамотрицательная флора, и какой она бывает

Мир полон микробов. Это утверждение на 100% соответствует распространению этой флоры. Существует множество семейств грамотрицательных кокков (шаровидных микробов) и палочек.

К ним относят, в том числе:

• псевдомонады. Они применяются в химической и микробиологической промышленности, как продуценты многих органических кислот и соединений;
• Моракселлы;
• ацинетобактерии;
• флавобактерии.

Непосредственно заболевания у человека вызывают сальмонеллы (сальмонеллез, брюшной тиф), шигеллы (дизентерию), легионеллы. Наиболее яркими представителями патогенной флоры являются нейссерии, вызывающие гонорею и менингит. Они относятся к диплококкам. Грамотрицательными являются гемофильные палочки, геликобактер пилори, энтеробактер и протей.

Эти микроорганизмы обладают общей способностью сохранять углеводную лабораторную среду, вследствие слабой ферментативной активности.

Эти неферментирующие сахар грамотрицательные бактерии находятся повсюду. Они встречаются в почве, в воде, попадают на пищевые продукты.

Испражнения человека и животных также сдержит большое количество этих микроорганизмов. Они находятся на коже, в верхних дыхательных путях.

Существуют полезные грамотрицательные микробы: так, азотфиксирующие клубеньковые бактерии на корнях бобовых растений, которые обогащают почву азотом, также относятся к данному виду микробной флоры.

К грамотрицательной флоре относятся и метановые бактерии, которые в качестве единственно возможного источника пищи рассматривает СН4, или метан.

Некоторые кокки и палочки относятся к факультативным анаэробам, то есть для их роста и размножения вовсе не обязательно присутствие кислорода воздуха.

Роль в развитии заболеваний

Грамотрицательными бактериями являются многие условно – патогенные виды. Это означает, что если у человека сильный иммунитет, то ему не страшна такая инфекция.

Конечно, чума или холера может «свалить» любого здоровяка с непредсказуемыми последствиями, а вот внутрибольничная инфекция, к которой и относят грамотрицательные палочки, способствует развитию внутрибольничных пневмоний, раневых госпитальных инфекций у ослабленных людей. Отчего это происходит?

Просто в силу своей «толстокожести» эти микробы иногда выживают, несмотря на дезинфекцию. Они находятся на масках наркозной аппаратуры, на ларингоскопах и бронхоскопах, на нестерильных повязках. Это вовсе не значит, что они такие зловредные, просто все другие микробы были уничтожены асептикой и антисептикой, а часть стойких грамотрицательных кокков и палочек осталась.

В заключение нужно отметить, что заражение человека различными возбудителями из рода условно – патогенных микроорганизмов, чаще всего происходит при выраженном снижении иммунитета, при хронических заболеваниях, а также при ВИЧ – инфекции. Поэтому длительно и часто болеющие простудными, гнойничковыми и воспалительными заболеваниями пациенты должны обратить внимание на состояние иммунной системы, чтобы избежать неприятного знакомства с условно – патогенной флорой.

Источник: http://parazity.info/gramotritsatelnye-bakterii-ih-stroenie-i-naibolee-chastye-zabolevaniya.html

Грамположительные и грамотрицательные бактерии. Грамположительные бактерии: строение :

В большом мире, перефразируя классиков, делаются серьезные дела: запускаются космические корабли, покоряются земные полюса, изобретаются лекарства от неизлечимых болезней. В то же время в микромире тоже кипят нешуточные страсти: вирусы и бактерии пытаются выжить в условиях жестких реалий и тотальной медицинской охоты.

Бактерии: кто они?

Микроорганизмы широко распространены как в окружающем мире, так и внутри человеческого тела.

Некоторые из них используются в медицине, фармакологии, пищевой промышленности. Сравнительно небольшую их часть принято делить на группы: патогенные и условно-патогенные. Первый тип вызывает инфекционные недуги, а второй представляет собой человеческую микрофлору.

Причем условные патогены могут вызывать воспалительные процессы при условии ослабления иммунитета. Кроме прочего, они отличаются размерами и строением оболочки.

Грамположительные бактерии, клеточная стенка которых довольно крупная, и грамотрицательные микроорганизмы, с тонким защитным слоем, имеют существенные отличия.

Отличия по Граму

Впервые термин “грамположительные и грамотрицательные бактерии” в науку ввел датский ученый Грам.

Использовав при окрашивании микроорганизмов специальный краситель генцианвиолет, бактериолог заметил, что одна группа бактерий поддается окраске, в отличие от второй. Позже ученый выяснил, что причиной этому стала клеточная стенка. Таким образом, окрашиваемые субстанции получили название грамположительные бактерии, а те, которые на краситель не реагировали – грамотрицательные.

Грамположительный мир

Эти микроорганизмы окрашиваются способом Грама в фиолетовый цвет. Смысл процедуры состоит в том, что толщина защитного слоя бактериальной клетки довольно высока, за счет чего краситель удерживается. Грамположительные бактерии представлены стафилококками, стрептококками.

Кроме того, грамположительные бактерии – возбудители таких опасных недугов, как газовая гангрена, столбнячная инфекция, сибирская язва. От грамотрицательных бактерий они отличаются по строению и толщине клеточной стенки.

Именно она определяет внешний вид микроорганизмов: спиралевидный холерный вибрион, шаровидная кокковая форма. Бактериальная клетка отличается от клеток млекопитающих наличием жесткого защитного каркаса, состоящего из плотного биополимерного слоя, и химическим составом.

Грамположительные бактерии имеют толстый ригидный слой (клеточную стенку). Защитная оболочка состоит из полипептидов и полисахаридов. До 70% стенки составляет муреиновый мешок. В его состав входят: лизин, ацетилглюкозаминин, ацетилмурамовая кислота, диаминопимелиновая и тейхоевые кислоты.

Основные виды грамположительных бактерий

Большинство опасных для человека микроорганизмов – грамположительные бактерии. Они вызывают такие заболевания, как ботулизм или столбняк, эти болезни плохо поддаются лечению. Кроме того, микоплазму, которую не относят к этому типу, также произвели на свет грамположительные бактерии.

Виды грампозитивных микроорганизмов:

• кокки: клетки, соединенные между собой с помощью целлюлозы; в основном это анаэробные молочнокислые стрептококки;
• палочки: спорообразующие представлены анаэробными клостридиями; не способные образовывать споры – молочнокислые лактобациллы;
• коринеморфы: отличаются склонностью к изменению формы – это стрептомицетовые и пропионовокислые бактерии.

Подобные микроорганизмы вызывают массу недугов. Стафилококки провоцируют грибковые инфекции. Особенно опасен золотистый стафилококк.

Стрептококковые микроорганизмы вызывают фарингиты, рожу, реже пневмонию, сепсис.

Энтерококки часто поражают мочевыводящие пути, сердечную мышцу и провоцируют нагноения в ранах.

Заражение пневмококком зачастую проходит в сопровождении острых симптомов. Синуситы, отиты, внезапные генерализированные пневмонии – вот список заболеваний, вызванных этим возбудителем.

Газовую гангрену вызывают бактерии под названием клостридии. Заболевание столбняком также обязано своим существованием этому виду бактерий. Причем столбнячные споры очень живучи: выдерживают длительное кипячение и замачивание в дезинфицирующих растворах.

Грамотрицательные микроорганизмы

В отличие от грампозитивных собратьев, они не окрашиваются в характерный цвет.

Напомним, что грамположительные бактерии, строение которых отличается более плотной клеточной оболочкой, не теряют фиолетовый цвет даже во время промывания. Тогда как грамотрицательные прокариоты поддаются полному обесцвечиванию.

Но при этом контрастный сафранин окрашивает эти бактерии в розовато-красные цвета. Несмотря на более тонкую стенку, которая прочнее, нежели у иного вида бактерий, грамотрицательные микроорганизмы сложнее поддаются действию антител.

Заболевания, вызываемые грамотрицательными бактериями

Грамположительные и грамотрицательные бактерии отличаются реакцией на антибиотики. Более устойчивой к ним является вторая группа микроорганизмов.

Многие виды представляют собой объект пристального внимания медицины. Это бактерии, вызывающие венерические болезни: гонорею, сифилис, хламидийные инфекции.

Грамотрицательные патогены, провоцирующие респираторные заболевания – моракселла катаралис, проблемы с дыханием – легионелла, клебсиелла.

Также эти устойчивые бактерии вызывают менингит, нарушения пищеварения или язвенную болезнь желудка (сальмонелла, хеликобактер пилори, эшерихия коли). По форме бактерии довольно разнообразны: спириллы, палочки, спирохеты, вибрионы, трубчатые чехлы.

Знания о микроорганизмах – на пользу медицине

Информация о возбудителях различных болезней, как грамположительных, так и грамотрицательных, значительно упростила лечение многих недугов. Понимание того факта, что мембрана грамотрицательных бактерий прочнее остальных, позволила ученым выяснить их важное свойство: устойчивость ко многим видам антибиотиков.

Кроме прочего, знания о мутациях и приспосабливании микроорганизмов к лекарственным препаратам также улучшили качество лечения бактериальных инфекций. Немаловажным аспектом является информация о том, что прежде всего влияют на организм токсины, выделяемые грамположительными и грамотрицательными видами бактерий.

Но наука не стоит на месте, и уже разработаны медикаменты, которые способны справиться с мембранной защитой грамотрицательных микроорганизмов. При этом имеет значение состояние макроорганизма в целом: его иммунный ответ и объемы воспалительных процессов.

Источник: https://www.syl.ru/article/221870/new_grampolojitelnyie-i-gramotritsatelnyie-bakterii-grampolojitelnyie-bakterii-stroenie